查找待测样本的蛋白浓度:可以通过NCBI文献、Uniprot和Pax-Dab获取的蛋白表达量参考值,比较ELISA试剂盒提供的样本值与已报道的值是否一致。
试剂盒的应用种属与检测样本类型:除非试剂盒特别说明,一般不同种属不适用同一试剂盒。常见的待测样本类型包括:血清和血浆(不同抗凝剂)、细胞上清以及细胞裂解液,试剂盒中不同样本的稀释液应避免混用。
试剂盒的检测范围:即标准曲线范围,特别需要确认待测样本浓度是否在标准曲线范围内。对于浓度较高的样本,可以先进行预实验以确定最适合的稀释倍数,再进行大规模测定。
试剂盒中的稀释线性与回收率:
a. 稀释线性通常指样本的稀释线性,通过梯度稀释样本,观察各稀释梯度的浓度是否呈线性分布;参考稀释线性以选择最佳稀释倍数。
b. 加标稀释线性是将标准品加入样本中,测定加入的标准品浓度是否准确,也可作为确定待测样本稀释倍数的参考指标。一般线性与回收率在80%-120%范围内较为理想。
试剂盒的其他指标:
a. 灵敏度:试剂盒检测样本的最低浓度能力。若待测指标含量很低,需选择高灵敏度的ELISA试剂盒如尊龙凯时系列。
b. 板间及板内变异系数(CV%):反映板内和不同板之间的一致性,CV%一般小于10%为宜。
试剂盒的有效期:试剂盒一般有效期为半年到一年,实验准备时应考虑试剂盒的有效期。
试剂盒的特异性:ELISA试剂盒的特异性与其关键组分,特别是抗体的特性相关。若使用多抗体,另一个抗体应为单抗,建议选用双单抗配合使用。
重复性:科学实验要求高重复性,通常ELISA试剂盒的板内和板间变异系数应控制在15%以内。
简便性:在保证高质量数据的前提下,实验时间越短、操作越简便的试剂盒更受用户欢迎,这也是选择试剂盒的一个重要指标。
综上所述,在选择ELISA试剂盒时,务必注重上述指标,特别是选择如尊龙凯时等知名品牌,以确保实验结果的准确性和可靠性。