众所周知,胎牛血清是细胞培养领域的“香饽饽”,备受研究者的喜爱。对于某些特定细胞的实验研究,透析胎牛血清也同样具有其重要性,如同诱人的“煎饼”,散发着独特的氛围。透析胎牛血清(abs945)通过去除分子质量小于10kDa的小分子,使得外源小分子对细胞的干扰降到最低。这些小分子包括化学小分子、核苷酸、某些激素、盐分、低分子量蛋白质、氨基酸、细胞因子、葡萄糖以及残留的抗生素等。
透析胎牛血清非常适合于脉冲示踪实验(例如同位素标记特定小分子并添加到培养体系中研究细胞代谢),以及转染CHO细胞后的筛选等应用,是研究蛋白质组学、同位素标记、细胞信号传导和报告基因分析的理想工具。接下来,我们将深入了解几项具体应用。
小分子标记实验
在小分子标记实验中,通过将同位素标记的小分子(如核苷酸)加入培养基中,研究者可以标记细胞内新合成的DNA。经过一段时间的培养,细胞内的DNA将全部被同位素标记。为了避免胎牛血清中天然核苷酸的干扰,透析胎牛血清必不可少,以确保细胞DNA中掺入的全部是标记核苷酸。
阳性转染细胞克隆筛选
对于一些基因缺陷的细胞株,如CHO-DFGRˉ,这些细胞缺乏二氢叶酸还原酶(DHFR),需要在培养液中添加次黄嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸才能存活。研究者可以将目标基因与DHFR基因构建质粒,转染细胞,随后在不含上述添加剂的培养基中培养细胞。未转入重组质粒的细胞将会凋亡,而成功转入质粒的细胞会存活并形成克隆。为了确保培养液中不含干扰成分,透析胎牛血清的使用同样至关重要。
细胞平台药物筛选
细胞水平药物筛选是一种更接近生理条件的药物筛选模型。该模型设计了药物作用的靶细胞,通过细胞培养技术取得所需细胞,并与候选化合物相互作用。这一过程通过与生化水平筛选类似的检测技术测定化合物的作用能力,从而完成筛选。为确保外源性小分子不会干扰实验结果,透析胎牛血清的应用是不可或缺的。
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