人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45的培养说明书
一、细胞培养条件
细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45
生长特性：悬浮生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基（含NAHCO315g/L） + 10% FBS + 1% P
传代方法：首次建议1:2传代，2天后更换培养基。备注：使用无菌离心管收集培养基以作为对比培养。如果对比效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
将细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，务必用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37°C、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再做后续处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议拍摄倍数为40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片为重要的售后依据，如未提供照片则默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以进行对比培养，换液后请松动瓶盖。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
当细胞未超过80%汇合度时，将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基并放入37°C、5% CO2孵箱继续培养；若细胞密度超过80%，可以进行传代，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
- 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37°C培养箱中，消化1-2分钟，然后显微镜下观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中并在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml完全培养基重悬。
- 将细胞悬液按1:2的比例分瓶，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放回37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存
- 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
- 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，翻转显微镜下观察，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中并以1000rpm离心5分钟。
- 弃去上清，沉淀细胞加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
- 直接将冻存细胞放入-80°C冰箱中，若后续要转入液氮罐中，需在-80°C冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37°C水浴中解冻，直至冻存管无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
- 将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
- 弃上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37°C、5% CO2培养箱中。
- 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
某些细胞可能贴壁不牢，运输过程中容易脱落，这属正常现象。如细胞脱落较多，可将培养瓶内的培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养（用于后期对比培养）。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打再重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加入1-2ml完全培养基重悬。随后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后再次放入37°C、5% CO2培养箱中培养。
五、售后条款
- 细胞出现问题，可重发的情况：
- 运输途中遭遇问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，可申请重发。
- 出现细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
- 常温发货的细胞静置24小时后及干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，大部分细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），可重发。
- 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后并未开封且出现污染，符合条件可重发。
- 如细胞活性问题请在收到产品7天内提供真实实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
- 收到细胞当天及第2、3天需拍照，若3天内未告知问题则视为产品合格。4-7天内如有问题，需提供收到细胞前3天的照片以及操作细节，经技术人员确认后可重发。
- 细胞出现问题，不予以重发的情况：
- 客户造成的细胞污染。
- 客户不正确操作导致细胞状态不佳。
- 使用非本库推荐培养体系导致细胞状态不佳。
- 如未提供细胞培养前3天照片则不予重发。
- 细胞培养过程经过其他处理的不予重发。
- 细胞收到2天内未告知情况的不予重发。
- 具体情况另行评估。
津公网安备 12011302120117