尊龙凯时提供大鼠肺泡上皮细胞L2的培养与操作指南，旨在为生物医学研究提供可靠的支持。以下是详细的细胞培养说明。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首次传代比例建议为1:2。每两天更换培养基。
备注：使用无菌离心管收集培养基并留作对比。如果对比效果不佳，建议购买尊龙凯时的完全培养基进行实验。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，培养至良好状态，将完全培养液灌满并密封瓶口，确保细胞的稳定性。使用75%酒精消毒细胞瓶，随后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，然后再进行后续操作。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为售后服务的重要依据。注意在放入培养箱时应将瓶口稍微松开，传代时一须使用原瓶的完全培养基，另一则使用自制的完全培养基以便进行对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度低于80%，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基在温箱中培养。如果汇合度超过80%，则进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙镁PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化。若细胞大多数变圆并脱落，迅速加入5ml完全培养基终止消化。
3. 仔细吹打细胞以确保完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，重悬细胞。
4. 按1:2比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察直到细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打脱落细胞，转移至15ml离心管并离心。
3. 弃去上清，再次重悬细胞，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转入冻存管。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，若后续转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，擦拭外壁消毒。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中并离心。
3. 弃去上清，重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中可能因贴壁不牢而掉落，此为正常现象。可按以下方法处理：将培养液收集到离心管，离心后收集上清进行对比培养，沉淀后用胰酶消化，再按照上述传代步骤进行。

五、售后条款

尊龙凯时将提供全面的售后服务，细胞出现问题可进行重发的情况包括：

• 运输途中出现问题，如细胞丢失、瓶破损等。
• 细胞污染需在收到产品48小时内提出真实结果，经核实后可重发。
• 特殊情况下细胞活性问题需及时提供实验结果及照片。